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导读 大家好,小耶来为大家解答以上的问题。阳性克隆鉴定的方法有哪些,阳性克隆这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!1、简单的说一下:1...
大家好,小耶来为大家解答以上的问题。阳性克隆鉴定的方法有哪些,阳性克隆这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!
1、简单的说一下:1.扩增目的基因,比如通过PCR的方法。
2、2.PCR扩增的序列可以通过酶切或者TOPOTA的方法插入到载体质粒。
3、3.转染大肠杆菌4.筛选阳性克隆一般常采用蓝白克隆方法,就是在载体上,序列的插入位置本来是一个完整编码β-gal这个酶的序列,如果不被破坏,产生的酶可以降解细菌培养盘上的底物,形成蓝色产物。
4、如果有目的序列插入,这个酶就不能表达,形成的克隆就是白色的。
5、5.挑取阳性克隆,测序确认无变异和方向后,扩增质粒,提纯质粒。
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